Голофермент ДНК-полимеразы, который является основой реплисомы, содержит две молекулы ДНК-полимеразы III (по три субъединицы в каждой Кор-фермент), две копии ?-белка, ?-комплекс (пять субъединиц) и два ?-белка , связанные с каждой полимеразой. Назначение компонентов голоферменту содержание вместе и обеспечение координации работы компонентов реплисомы, повышение процесивности ДНК-полимеразы.

Проблема процесивности решается ?-белком, который образует так называемый обруч (зажим), скользящей (sliding clamp). Две одинаковые субъединицы обруча, крепко взаимодействуя по принципу? Голова к хвосту, образуют циркулярную тороподибну структуру с отверстием примерно 35 ? в диаметре (рис. 9.14). Внутри такого кольца легко помещается двойная спираль ДНК, которая практически не взаимодействует с ?-белком. Кольцо может свободно двигаться вдоль ДНК, но не может диссоциировать.

С-концевой гидрофобный хвост ДНК-полимеразы ИИИ длиной 11 аминокислот взаимодействует с гидрофобным карманом обруча. В результате формируется своеобразный поводок, что допускает определенную свободу движений полимеразы, но крепко удерживает ее на ДНК. Поскольку обруч? белковое кольцо, окружающее ДНК, его загрузки на двойную спираль выполняется АТР-зависимым путем, эта функция принадлежит ?-комплекса. Происходит загрузка на гибридной двойной спирали РНК-ДНК сразу после окончания синтеза очередного праймера. ?-Комплекс, состоящий из пяти субъединиц и имеет U-образную структуру (рис. 9.15), связывающей АТР и меняет свою конформацию таким образом, который взаимодействует с обручем, нарушая его целостность? размыкая кольцо. Далее ?-комплекс узнает дуплекс, образованный между праймером и матрицей, обеспечивая посадку открытого кольца на двойную спираль. Взаимодействие с дуплексом индуцирует АТРазну активность ?-комплекса. В результате гидролиза АТР ?-комплекс теряет сродство к ?-белка, что приводит к замыканию обруча. Далее ?-комплекс вновь связывает АТР, однако обруч имеет высшее сродство к ДНК-полимеразы, чем в ?-комплекса: обруч остается на ДНК и взаимодействует с полимеразой и обеспечивает ее процесивнисть.


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+