Альтернативным и дополнительным к клонированию методом увеличения количества желаемого фрагмента ДНК амплификации является полимеразная цепная реакция (ПЦР или PCR? Polymerase Chain Reaction). ПЦР это реакция синтеза ДНК in vitro, которая повторяется много раз: синтезированные цепи становятся матрицами для синтеза в следующем цикле реакции. Для осуществления ПЦР нужно знать минимум короткие последовательности ДНК на концах того фрагмента, который должен быть амплифицированных.

Реакционная смесь содержит следовую количество исходной ДНК, избыточные количества двух синтетических праймеров к концам фрагмента, нуклеозидтрифосфаты четырех типов и ДНК-полимеразу Taq термофильные бактерии Thermus aquaticus. Использование именно полимеразы Taq викликантим, что она не теряет своей активности при нагревании до высоких температур. В каждом цикле реакции происходит нагревание смеси до 95 ° С (денатурация ДНК) и охлаждения до 60 ° С. После охлаждения до такой все еще достаточно высокой температуры цепи ДНК не ренатурують, но праймеры (поскольку они присутствуют в достаточно высоких концентрациях) находят свои комплементарные участки, связываются с ними, и полимераза Taq начинает работать, продлевая эти праймеры.

Метод ПЦР имеет чрезвычайно широкое применение. Им пользуются каждый раз, когда есть необходимость детектировать и исследовать не-большое количество ДНК, в том числе? в составе неочищенного биологического материала. ПЦР применяют также в комбинации с клонированием: амплифицированных ДНК-продукт можно клонировать и использовать, например, для экспрессии белка (см. ниже) амплификация с помощью ПЦР становится полезным для увеличения небольшого количества клонированной ДНК.


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+