Вирусные препараты

 

Вирусы продуцируются только в живых клетках соответствующих организмов-хозяев, чем определяются и способы их массового получения при создании вирусных препаратов. Есть несколько принципиальных возможностей накопления вирусной массы: заражение хозяина и последующее очищение инфекционного материала, культивирования и заражение клеток, чувствительных к тому или иному вируса in vitro, использование изолированных органов животных, конструирования бесклеточных систем.

 

Сегодня в производственных условиях при получении вирусных препаратов для защиты растений от вредителей реализуется первая из этих возможностей. При этом особое значение приобретает технология массового размножения насекомых. Это специальный вопрос, которому посвящено немало научных трудов. Выращивание насекомых на искусственных питательных средах в промышленных инсектариях позволяет в принципе обеспечить производство вирусных препаратов для большинства насекомых-хозяй-даров энтомопатогенных вирусов. Определенные трудности возникают при работах с хвоефизучимы вредителями, особенно - Пильщиков. Эти виды не удается культивировать на питательных средах и вся практика вирусологической борьбы с ними основывается на сборе личинок в местах их массового размножения, доращивании на природном корме, искусственном заражении и в дальнейшем - на соблюдении всех необходимых операций для получения препарата (рис. 65). Во всех случаях задача состоит в том, чтобы получить максимальный выход вирусной массы с каждой личинки.

 

Проблемы, которые возникают при получении вирусных препаратов на насекомых, связанные с обеспечением оптимальных условий заражения личинок, включая их возраст, условия температуры и влажности, режим питания и т.п.. Все эти факторы существенно влияют на интенсивность развития вирусной инфекции и в результате от них зависит объем полученного инфекционного материала.

 

Важным моментом в процессе производства вирусного препарата является иммунологический контроль идентичности получаемого вируса и выходного производственного штамма, поскольку в популяциях насекомых нередко активируются латентные формы вирусов и патологический материал может содержать не выходной, а случайный штамм.

 

Очистка вирусовмисного патологического материала и его концентрация осуществляется чаще всего с помощью центрифугирования.

 

Вирусные препараты обычно выпускают в жидкой форме, где в качестве наполнителя используют глицерин, и в сухой - с метилцеллюлоза, или другими веществами.

 

В странах СНГ предложено регламенты нескольких препаратов ка основе бакуловирусив. Все эти препараты созданы на основе массового размножения насекомых-хозяев соответствующих вирусов.

 

Эти вирусные инсектицидные препараты, как правило, называются Вериных. их различают по дополнительным обозначениями, являются первыми буквами российских видовых названий насекомых-хозяев. Если препарат создан на основе вируса - возбудителя гранулезы, букве-на аббревиатура дополняется буквой Г. Например, название препарата «Вериных-ГЯП» означает, что этот препарат создан на основе вируса - возбудителя гранулезы плодожорки яблонной (табл. 21).

 

Производство вирусных препаратов на основе культивирования клеток в условиях in vitro - найперспсктивниший технологическое направление, поскольку предполагает использование совершенного ферментационного оборудования микробиологической промышленности, дает возможность осуществлять отбор наиболее эффективных штаммов вирусов и контролировать их чистоту. Сегодня разработка этого направления находится в стадии лабораторных испытаний.

 

Известны десятки перевиваемых линий клеток беспозвоночных. Это преимущественно ткани чешуекрылых и двукрылых насекомых, которых культивируют на сложных средах с добавлением, как правило, эмбриональной сыворотки позвоночных и крови беспозвоночных.

 

Поиск путей получения вирусных препаратов на культурах клеток связан прежде всего с выращиванием их в суспензии. Суспензионные культуры обеспечивают рациональное использование питательной среды и получения максимального количества вирусного материала.

 

Оптимальная температура для роста клеток и репродукции энтомопатогенных бакуловирусив составляет +26-28 ° С. Удвоение количества клеток в культуре при этом происходит в течение 16 часов. Заражение клеток осуществляется стерильными вирусными суспензиями, или с помощью гемолимфы больных насекомых, предварительно пропущенная через стерилизующий фильтр. Скорость репродукции зависит как от активности вируса, так и от природы клеток и условий их культивирования. Обычно первые синтезированные вирусные частицы обнаруживают во внеклеточной жидкости через 12 часов после заражения, через 20 часов наблюдается формирование полиэдров, а максимум их - через трое суток после инокуляции инфекционного материала. Клетки, выращенные в 10 мл питательной среды, дают в среднем 2 мг полиэдров. На количественном выходе вируса с единицы питательной среды в культуре может сказываться направлен физико-химическое воздействие. В частности, обнаружено стимулирующее влияние на продукцию вируса ядерного полиэдра в клеточных линиях насекомых лучей Рентгена (Koval, Hink, 1977).

 

На сегодня доказана возможность культивирования всех основных групп энтомопатогенных вирусов перевиваемых клетках насекомых. Причем групповая специфичность, характерная для инклюзийних вирусов насекомых, в данном случае выражена значительно меньшей степени. Если в условиях in vitro бакуловирусам удается перекрестное заражение насекомых только в пределах рода, то in vitro, как правило, происходит репродукция вирусов-хозяев насекомых, принадлежащих к разным семействам.

 

В работах по использованию клеток беспозвоночных для производства вирусных препаратов актуальными остаются ряд проблем. Прежде всего, следует максимально упростить питательные среды и снизить их стоимость, повысить активность размножения клеток, максимально сократив время удвоения их количества в культуре за единицу времени, оптимизировать процесс внесения инфекционного материала и разработать приемы направленного воздействия на систему «клетка-вирус» для максимального выхода вирусной массы.

 

Исследования субклеточных систем беспозвоночных с целью производства вирусных препаратов для защиты от вредных организмов - важная научная и прикладная проблема, хотя сегодня она еще почти не разработана. Имеющийся опыт конструирования субклеточных систем и синтеза в них передвирусних белковых компонентов и провирусов дают основания считать эту проблему перспективной в биометод.


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+