Оптические свойства белков. Как правило, все белки, поглощают ультрафиолетовое (УФ) свет в трех зонах. Поглощения при длине волны более 250 нм с максимумом около 280 нм обусловлено наличием исключительно ароматических аминокислот - фенилаланина, тирозина, триптофана. Полоса поглощения, максимум которой находится вблизи 190 нм, обусловлена, главным образом, пептидными связями. На перечисленных свойствах основано спектрофотометрических метод количественного определения белка. Он не очень точный, поскольку количество тирозина и триптофана в разных белках варьируется в достаточно широких пределах. Несмотря на недостаточную точность, этот метод широко применяют в современной биохимии, благодаря его простоте и скорости выполнения.

 

В инфракрасной (ИК) части спектра (760-10000 нм) поглощают свет все белки. ИК-спектроскопию широко используют для определения относительного содержания а-спиралей, ?-структур и аморфных участков в белковой молекуле.

 

Белки являются оптически активными соединениями: они обращают плоско-поляризованный свет, который проходит через их раствор, и неодинаково поглощают левое и правое циркулярно поляризованный свет. Указанная свойство белков объясняется наличием в их молекуле хиральных атомов углерода. Взаимодействие с белками поляризованного света изучают с помощью методов дисперсии оптического вращения (ДОО), кругового дихроизма (КД). Эти методы применяют для общего описания содержимого спиральных структур в белках и исследования Конформ-ных изменений. Белковые растворы способны также флуоресцуваты - выпускать квант света при переходе из электронного возбужденного состояния в основное. На этом свойстве белков основывается флуоресцентная спектроскопия. Флуоресценция характерна для таких аминокислотных остатков в молекуле белка, как фенилаланин, тирозин, триптофан. Измерение флуоресценции дает сведения о конформационные перестройки белка в местах присоединения лигандов, взаимодействия с растворителями, степень гибкости молекулы, межмолекулярные расстояния и тому подобное.

 

Количественные методы определения белков используются в фармацевтической практике, в том числе в контрольно-аналитических лабораториях для контроля белковых лекарственных средств (вакцин, сывороток, гаммаглобулина, гистаглобулин, гормонов, ферментов, белковых препаратов крови и т.д.), а также для определения удельного активности ферментных препаратов.

 

Для количественного определения белков в лекарственных средствах и биологическом материале чаще всего используют фотоколориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях количество белка определяют по содержанию общего азота (азотометриею), а также фо-тонефелометриею.

 

В клинико-биохимических лабораториях с целью постановки диагноза многих заболеваний определяют концентрацию белка в биожидкостях организма (кровь, моча, спинномозговая жидкость, экссудаты). В сыворотке крови содержится смесь белков, которые отличаются по физиологическим значением, структурой и физико-химическими свойствами. В настоящее время известно около 100 различных белков плазмы крови. В норме содержание общего белка в сыворотке крови составляет у взрослых 65-85 г / л (6,5-8,5 г%), у детей до 6 лет - 56-85 г / л или 5,6-8,5 г %.

 

Повышение концентрации белка до 120 г / л (гиперпротеине-мия) встречается редко. Это наблюдается при некоторых хронических воспалительных процессах за счет образования антител (полиартрит, ревматизм, миеломная болезнь - плазмоцитома). Кратковременная относительная ги-перпротеинемия отмечается при сгущенно крови через значительные потери жидкости, например, при усиленном потоотделении, неукротимой рвотой, холере, несахарном диабете, тяжелых ожогах и т.п. Снижение количества белка (гипопротеинемия) имеет место при недостаточном поступлении белка с пищей (голодание), нарушении проходимости кишечного тракта, нарушении процессов биосинтеза белков в органах, поражении печени химическими веществами, микроорганизмами, опухолями, при потере белка организмом (кровотечение, повышенная проницаемость сосудов, заболевания почек, беременность и т.д.).

 

Методам количественного определения белка принадлежит значительное место в научно-исследовательских экспериментах.


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+