В последнее время, как кандидаты на роль векторов для переноса генов в растения, рассматривают ДНК-содержащие вирусы растений. Перспективным в этом плане и поэтому лучше изученным является вирус мозаики цветной капусты CaMV (cauliflower mozaic virus), который поражает в основном растения семейства крестоцветных. Частицы этого вируса имеют диаметр около 50 нм и содержат кольцевую ДНК размером 8 кб.

 

Небольшой размер генома CaMV дает возможность манипулировать in vitro с вирусной ДНК, как с бактериальных плазмид, а затем ввести его в растения путем втирания в листья. Инфицирование незначительного количества клеток приводит к заражению всего растения, так как вирус быстро распространяется, передаваясь от клетки к клетке. При использовании 1-5 мкг клонированной ДНК для инфицирования одного растения путем механической инокуляции достигается почти 100%-ная эффективность инфекции.

 

Для клонирования ДНК CaMV в E. coli используют плазмидные векторы E. coli, например, рВR322. После обработки соответствующими рестриктазами ДНК CaMV и рВR322 и лигирование образуется гибридная плазмида, которая способна к амплификации в E. coli.

 

Среди преимуществ векторных систем на основе вирусов следует отметить малый размер генома, что дает возможность легко манипулировать вирусной ДНК и высокую копийнисть вирусной ДНК в клетках зараженных растений (до 50000 на клетку).

 

Недостатками этих векторных систем является небольшая емкость вектора (менее 800 п.н.) и ограниченный круг хозяев - крестоцветные. Но следует отметить, что сильные вирусные промоторы могут использоваться для экспрессии чужеродных генов в других векторных системах. Например, промотор 35S вируса мозаики цветной капусты является сильным промотором, который не проявляет тканиноспецифичности экспрессии и активен не только в клетках крестоцветных, но и в клетках растений других семейств.

 

Как векторы для трансформации может быть использована хлоропластная и митохондриальная ДНК.


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+