Способы культивирования изолированных протопластов соответствуют тем, что используют для выращивания клеток. Протопласты культивируют в жидком и агаровом средах (табл.6).

 

Одним из приемов культивирования изолированных протопластов в жидкой среде является метод жидких капель. В этом случае суспензию протопластов в виде капель помещают на жидкую среду в чашках Петри. Метод обеспечивает хороший газообмен. Однако при культивировании этим способом изолированные протопласты агрегируются в центре каждой капли, накапливаясь они образуют значительные количества фенольных и других токсичных соединений, что мешает нормальному культивированию протопластов.

 

Второй способ культивирования изолированных протопластов - агаровой культуры или метод плейтинга. В этом случае определенный объем суспензии протопластов в жидкой питательной среде наливают в чашки Петри, добавляют равный объем того же среды, содержащей 1% агара. Температура не выше 450С. Чашки Петри заклеивают парафилмом и культивируют перевернутыми при температуре около 280С.

 

Протопласты фиксированы в одном положении и физически отделены друг от друга. Основное преимущество, этого способа культивирования это возможность наблюдать для каждого конкретного протопласта всю последовательность развития - формирование клеточной стенки, деление клеток, рост и развитие растения. Недостаток в возможном повреждении протопластов когда они смешиваются с агар-агаром.

 

Разновидностью агаровой культуры есть совместимые культуры. Этот способ используется для эффективного культивирования некоторых протопластов. Протопласты, которые отличаются быстрым ростом, смешивают с протопласты, которые трудно культивировать. Считают, что успешное культивирование обусловлено веществами, которые выделяют протопласты, быстро растут.


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+