Известно, что в нативных условиях растительная клетка функционирует в узких пределах колебаний концентрации ионов водорода. Относительная стабильность величины рН во внутреннем и окружающей клетку среде поддерживается буферными системами, в которых важнейшую роль играют белковые молекулы как амфолитом. Эти особенности следует учитывать при выращивании клеток тканей in vitro, потому что в состав питательных сред входит ряд сложных или активных компонентов, поглощения и функционирование которых зависит от степени протонизации внутри клетки и в окружающей среде. Поэтому относительную стабилизацию рН среды необходимо поддерживать введением в него хелатованих соединений или соответствующих буферов. Устойчивость и усвоение целого ряда компонентов питательной среды зависит от величины рН. Наиболее чувствительны к рН такие компоненты среды: ИОК, ГА3, витамины (В1, пантотеновая кислота). При низких значениях рН не происходит желатинирование агар-агара. От рН среды зависит доступность для тканей различных форм железа.

 

Большинство культур растут на средах с рН 5,5-5,8. Обычно рН готового среды устанавливается с помощью 10% или 1 N раствора КОН или NaOH, или 1 N HCl перед автоклавированием. Однако, следует учитывать, что во время автоклавирования рН среды изменяется, а именно уменьшается в результате образования сахарной кислот.

 

Особое внимание уделяется установлению оптимального рН в суспензионных культурах, так как последние способны изменять его значения за счет метаболитов, выделяемых в питательную среду. Возможно, в связи с этим культура тканей арахиса способна расти на средах с рН от 3,4 до 8,2 (оптимальное значение 6,4), а клетки корня сои - на средах с рН 4,5 - 5,5 .

 

Ткани некоторых растений при культивировании in vitro выделяют в среду фенольные соединения. Среда быстро темнеет и ткань отмирает. Чтобы предотвратить это необходимо добавлять в среду активированный уголь (1-2 г / л).


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+