Процесс изготовления гистологических срезов для световой и электронной микроскопии включает следующие основные этапы:

 

• взятие материала и его фиксация;

 

• уплотнение материала;

 

• изготовление срезов;

 

• окраска или контрастирования срезов;

 

• заключение срезов (только для световой микроскопии).

 

Фиксация является влиянием химическими (формальдегид, спирт и т.п.) или физическим (замораживание и т.д.) агентами, которые останавливают процессы клеточной жизнедеятельности, вызывая, в большинстве случаев, процесс необратимый коагуляции белков. Выбор способа и продолжительности фиксации зависит от особенностей объектов исследования и задач исследования (проницаемость тканей для различных фиксаторов неодинакова, некоторые типы окраски требуют применения специальных фиксаторов и т.п.). После применения некоторых фиксаторов (например, формалин) гистологический материал следует промывать в воде, после чего удалять воду с помощью спиртов возрастающей концентрации (от 60 ° до 100 °).

 

Уплотнения материала проводят или путем замораживания, или импрегнацией специальными уплотнительными средами (парафином, целоидином (для световой микроскопии), синтетическими смолами (для электронной микроскопии)). Для лучшего проникновения этих уплотняющих веществ в клетки и ткани применяют растворители (ксилол, хлороформ и т.д.).

 

Изготовление срезов (парафиновых и целоидинових) осуществляют с помощью специальных приборов - микротомов, из замороженной ткани - с помощью криотомив. Сегодня широкое распространение получила практика получения срезов фиксированной (а в некоторых случаях и нефиксированной) ткани без ее предварительного уплотнения с применением вибротомив. Толщина полученных гистологических срезов существенно колеблется (ее выбор зависит от цели исследования, выбранного метода гистологического анализа и устройства для изготовления срезов) от 4-20 мкм, которые изготавливают на санных или роторных микротомы (для световой микроскопии) до 400 - 800 нм (ультратонкие срезы для электронной микроскопии, их изготавливают ультрамикротомах).

 

Окраска срезов позволяет выявить различные микроструктуры клеток и тканей. Такие микроструктуры, отличаясь по своим физико-химическим свойствам, будут по разному воспринимать различные красители - основные, кислые и нейтральные.

 

Так, основные красители - красящие соли оснований (например, гематоксилин, метиловый синий, толуидиновый синий и т.д.), связываясь с кислотными соединениями гистологических структур (базофильными) и формируя нерастворимый цветной осадок, контрастируют их окраской в цвета синего.

 

Кислые красители (например, эозин, оранж т.п.), связываясь с основными соединениями гистологических структур, вызывают их контрастирования окраской в цвета соответствующего красителя (например, розового и оранжевого т.п.). Структуры, воспринимающие кислые красители, называют Оксифильные.

 

Интенсивность окраски существенно зависит от условий фиксации и количества вещества, прореагировала с красителем.

 

Нейтральные красители содержат как основные, так и кислые окрасят ные компоненты. Структуры же, воспринимают такие красители носят название нейтрофильных.

 

Импрегнация является методом выявления клеток и тканей, сплоченное на их различной способности удерживать или восстанавливать соли тяжелых металлов (серебра, свинца, осмия, золота).

 

Заключение срезов позволяет длительное время сохранять препарат (его окраска, прозрачность, структуру). Обычно срезы заключают в канадский бальзам, предварительно зневоднившы его в спиртах возрастающей концентрации. В некоторых случаях вместо бальзама используют водорастворимые среды (например, глицерин, желатина и т.п.).


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+