С появлением ПЦР, появилась возможность определения небольшого количества ДНК-мишеней, однако для окончательного исследования используются гибридизацийни технологии. Последовательность-мишень должна быть известна и существовать в форме двухнитевых ДНК.

 

ПЦР состоит из трех фаз:

 

1) денатурация двойной спирали ДНК при 94оС в течение 30-90 секунд для разъединения нитей

 

2) введение олигонуклеотидных праймера, который соединяется с последовательностью-мишенью; праймер соединяется с тремя концами обеих цепей ДНК. Этот процесс продолжается 30-120 секунд при температуре 55оС;

 

3) удлинение праймера путем добавления свободных нуклеотидов. Данный процесс происходит при действии фермента tag-полимеразы (ДНК-полимераза, которая выделяется из микроорганизма Thermus aquaticus, живущий при высокой температуре, например, в горячих гейзерах) и длится около 60-180 секунд при температуре 72оС. Удлинение праймера приводит к формированию дополнительных последовательностей-мишеней, которые действуют как шаблоны для последующих циклов. При выполнении 30 циклов, теоретически, последовательность-мишень увеличивается в биллион раз.

 

ПЦР можно применять и для определения РНК, однако заранее РНК конвертируют в ДНК с помощью фермента обратной транскриптазы. Существует большое количество модификаций ПЦР: in situ ПЦР, гнездовая ПЦР. Полимеразная цепная реакция используется для определения:

 

- Генетической характеристики опухолей с кроветворной ткани;

 

- Транслокаций в опухолях из кроветворной ткани и опухолях мягких тканей;

 

- Различных микроорганизмов в тканях (бактерии, вирусы, простейшие и грибы).

 

С помощью ПЦР недавно были открыты микроорганизмы Tropheryma whipplei и Rochalimaea henselae, вызывающих развитие бациллярных ангиоматозе.

 

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ. Новые возможности морфологического исследования открыли методы морфометрии и ее разделов - стереологии и стереометрии, изучающих пространственные свойства структур и их взаимосвязи. Морфометрическая характеристика нормальной и патологической морфологии человека благодаря применению современной компьютерной техники позволяет использовать весь комплекс современного математического анализа объектов и явлений, способствует поднятию изучения морфологии человека на качественно новый уровень, развитию теоретической (математической) патологии.

 

Изучение структурных основ болезней осуществляют на разных уровнях:

 

организменном, системном, органном, тканевом, клеточном, субклеточном и молекулярном.

 

Организменный уровень позволяет выявить болезнь целостного организма во взаимосвязи всех органов и систем.

 

Системный уровень - это изучение изменений в той или иной системе органов и тканей, объединенных общностью функций (например, система соединительной ткани, системы крови, системы пищеварения и др..).

 

Органный уровень позволяет обнаруживать такие изменения органов, которые в одних случаях можно хорошо видеть невооруженным глазом, а в других случаях применять микроскопические исследования.

 

Тканевой и клеточный уровне - это уровни изучения изменений в тканях, клетках и межклеточном веществе с помощью комплексных методов исследования.

 

Субклеточный уровень с помощью электронного микроскопа и других методов позволяет выявлять первые ультраструктурные изменения в клетках и межклеточном веществе, являются морфологическими проявлениями болезни.

 

Молекулярный уровень позволяет обнаруживать молекулы ДНК и РНК при использовании комплексных методов исследования - электронной микроскопии, имуноцитохимии, радиоавтографии т.д..


Загрузка...
Яндекс.Метрика Google+